ISSN: 1304-7191 | E-ISSN: 1304-7205
Thermal stabilization of horseradish peroxidase by covalent conjugation with dextran
1
2
Sigma J Eng Nat Sci 2009; 27(4): 216-225
Full Text PDF (Turkish)

Abstract

In this study, Horseradish Peroxidase-Dextran covalent conjugates were synthesized whose resistance was
increased against high temperature. Firstly HRP was purified by affinity chromatography using immobilized Con A. Enzyme-dextran conjugates with different molar ratios were synthesized using dextran aldehyde derivatives (Dextrans 17.500, 75.000, 188.000 Da) and purified enzyme. Activities of synthesized conjugates and purified enzyme at pH 7 is determined after keeping them for 0, 15 and 30 minutes in a 25, 30, 35, 40, 50, 60,70, 80 oC temperatured waterbaths and results are compared. In all keeping periods, a slight decline in the activities of HRP-Dextran conjugates against increasing temperatures is observed when it is compared to purified enzyme. Especially the conjugate with 1/10 molar ratio displayed quite well stability against high temperatures.


“Horseradish” peroksidazin dekstran ile kovalent konjugasyon sonucu termal stabilizasyonu
1Yıldız Teknik Üniversitesi, Fen-Edebiyat Fakültesi, Kimya Bölümü, Esenler-İSTANBUL
2Yıldız Teknik Üniversitesi, Kimya-Metalurji Fakültesi, Biyomühendislik Bölümü, Esenler-İSTANBUL
Sigma Journal of Engineering and Natural Sciences 2009; 4(27): 216-225

Bu çalışmada yüksek sıcaklığa dirençli Horseradish Peroksidaz-Dekstran kovalent konjugatları sentezlendi.
Öncelikle, HRP immobilize Con A kullanılarak affinite kromatografi yöntemi ile saflaştırıldı. Dekstranların
(Mw 17.500, 75.000, 188.000 Da) aldehid türevleri ve saf enzim örneği kullanılarak farklı mol oranlarında
enzim-dekstran konjugatları sentezlendi. Sentezlenen konjugatların ve saflaştırılan enzimin 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80 oC sıcaklıklardaki su banyosunda, 0, 15 ve 30 dakika bekleme süreleri sonunda pH 7’de aktiviteleri tayin edildi ve sonuçlar kıyaslandı. Tüm bekleme sürelerinde HRP-Dekstran konjugatlarının aktivitelerinde, artan sıcaklığa karşı saf
enzime göre daha yavaş bir düşme gözlendi. Özellikle 1/10 oranlı konjugat sıcaklığa karşı oldukça iyi direnç
gösterdi.